DETERMINACION DE UN Du (variante débil) ; 3º TRIMESTRE (ELENA) 2 de junio 2021

 3º TRIMESTRE

PRACTICA 33

DETERMINACION DE UN Du

• OBJETIVO

 Determinar la presencia de un Du en la superficie eritrocitaria.

• FUNDAMENTO 

El Du es un antígeno D débil, que no suele aparecer en pruebas normales para el Rh. 
Se sensibilizaremos los hematíes problema con un suero con anticuerpos anti-D. 
Luego los enfrentaremos al suero de Coombs. 
Si existe el antígeno Du en la superficie de los eritrocitos, se producirá la unión de los anticuerpos anti-D a sus receptores de membrana. 
Esto dará lugar a la aglutinación en presencia del suero Coombs, en una segunda fase.

• MATERIAL Y REACTIVOS 

 Tubos de centrífuga 
Centrífuga 
Pipetas Pasteur 
Gradilla 
Baño de agua 
Vaso de precipitado 
Rotulador
 Papel de filtro 
Suero anti-D humano 
Suero de Coombs
Suero fisiológico
Muestra de sangre

• DESARROLLO 

Previamente tenemos que buscar una muestra de sangre con Rh negativo,, lo buscamos por la prueba de determinación del grupo sanguíneo en porta.  

Una vez encontrada la muestra de sangre con Rh negativo podemos empezar:   

1. Preparamos todo el material y la zona de trabajo.    

2. Primero hacemos un lavado de hematíes, con 1 ml de sangre y 4 ml de solución salina al 0,9%, centrifugamos a 2000rpm 5minutos, cuando la centrifuga termine desechamos el sobrenadante con ayuda de una pipeta Pasteur. Este paso se repite mínimo 3 veces o hasta que el sobrenadante salga transparente.      

3. Terminado el lavado, suspendemos los hematíes al 5%, en otro tubo metemos 250 microlitros de hematíes, del botón que queda después de los lavados, junto con 4,750ml de solución salina y lo mezclamos con cuidado.     

4. De la suspensión al 5% , tenemos que verter 2 gotas en un tubo de hemolisis junto con otras 2 gotas del suero Anti-D, los mezclamos suavemente y los ponemos a incubar en el baño Maria a 37ºC durante 45 minutos. 

5. Pasado el tiempo de incubación, tenemos que volver a hacer 3  lavados, pero esta vez con 1 ml de suero fisiológico a 1000rpm 1 minuto.    

6. Terminados los lavados, se añade una gota de la solución de Coombs a los sedimentos y mezclamos suavemente.  

7. se centrifuga una vez mas a 1000rpm 1 minuto. Cuando saquemos el tubo veremos si hay o no aglutinación 

• RESULTADOS DEL PACIENTE 

 La prueba de determinación del grupo sanguíneo en porta, nos dio A-.  

 Si es +, hay antígeno Du en la membrana de los eritrocitos y se clasifica Rh+, variante Du. 

Si es -, se clasifica como Rh-. 

En el caso +, hay que realizar una prueba de Coombs directa, para confirmar el resultado.

El suero de Coombs (verde) y las muestras en los tubos de hemolisis durante el tiempo del baño Maria 

El resultado final es negativo, esta muestra es Rh- confirmada. 

• CONCLUSIONES 

La muestra de sangre que usamos era algo vieja y tuvimos que hacer 4 lavados, y en el baño Maria las muestras estuvieron 30 minutos en vez de 45.