PRÁCTICA 30 ; 3º TRIMESTRE (ELENA) 12 de mayo 2021

 3º TRIMESTRE

PRÁCTICA 30

TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (APTT)

• OBJETIVO

El APTT permite valorar la vía intrínseca de la cascada de la coagulación, con un proceso in vitro.

• FUNDAMENTO

Provocamos la coagulación usando cefalina mas un activador y Ca+2. 

• MATERIAL Y REACTIVOS

Micropipetas de distintas concentraciones
Varillas de acero
Pipetas Pasteur 
Agua destilada 
Vasos de precipitado
Coagulómetros y sus cubetas 
Tubos Eppendorf
Gradillas
Reactivos de kit
Muestras citratadas
Sangre anticoagulada con EDTA  

CaCl2 

• DESARROLLO

1. Primero centrifugamos la sangre con anticoagulante EDTA a 5 minutos y una vez centrifugada mezclamos todos los sueros de los tubos en un vaso de precipitado, ayudándonos de pipetas Pasteur. Luego pasamos este suero a distintas tubos Eppendorf. En este caso los sueros de EDTA serán la muestra de la prueba.  

2. Hacemos lo mismo del paso anterior, pero esta vez con el citrato, este será nuestra control.

 3. Preparamos el reactivo de trabajo  comercial y lo preparamos según venga el protocolo comercial, en este caso añadiéndole 4ml de agua destilada y agitando suavemente, sin formar burbujas y dejarlo reposar durante unos minutos. 

4. Encendemos el coagulómetro y con ayuda del manual de instrucciones lo  determinamos para APTT.

COAGULOMETRO:  

 A) Primero lo tenemos que encender y así la placa empieza a calentarse a 37ºC para incubar los reactivos y las muestras. También debemos programarlo para el tipo de prueba que queremos realizar. Presionamos el botón de TEST y con las flechas buscamos el sistema de prueba que queremos en ese momento, en este caso APTT y presionamos ENTER para confirmar. 

B)  Preparamos las 2 cubetas, una con 25ul de muestra de EDTA y la otra con el control de citrato, a continuación añadimos otros 25ul del reactivo, de la cefalina, a cada uno, esperamos 3 minutos y colocamos la cubeta que queramos medir en el hueco con OPTIC escrito al lado. Preparamos la micropipeta con otros 25ul de CaCl2, y pulsamos el botón OPTIC, esperamos a que en la pantalla ponga ACTIVE y vertemos el CaCl2 en la cubeta, el coagulómetro empieza a medir automáticamente el tiempo.  

C) Se hace lo mismo con la otro cubeta, anotamos los resultados de la prueba y veremos el coagulo  formado en el interior de la cubeta. 

• CALCULOS 

Los resultados normales de esta prueba están entre 27 y 42 segundos.
Pero también se considera anormal una diferencia de de mas de 8 segundos entre la muestra y el control  

Esta prueba puede detectar déficit de los factores de la vía intrínseca de la coagulación y control para los tratamientos con anticoagulantes y en las terapias con heparina. 

Otra forma de expresar los resultados es en forma de cociente o proporción (ratio) 

-Tasa de APTT o Ratio: 

Ratio= APTT muestra problema/APTT control

• MIS RESULTADOS

 Muestra de EDTA: 90 segundos.
Control citrato: 45,8 segundos.  

-Ratio: 1,96 

Los resultados son muy elevados. Esto significa que tarda mucho en coagular debido a un déficit en la vía intrínseca de la cascada de la coagulación.