PRACTICA 18 ; 2º TRIMESTRE 10 de febrero 2021

 2º TRIMESTRE

PRACTICA 18

DETERMINACION DE LA HEMOGLOBINA EN SANGRE

  • OBJETIVO

 Determinar la concentración de Hemoglobina, aprender hacer curvas de calibración y patrones para ello. También saber realizar medidas y cálculos matemáticos de absorbancia y concentración con el espectrofotómetro.

  • FUNDAMENTO 

Se basa en la transformación de la hemoglobina en CIANMETAHEMOGLOBINA, al añadir a la muestra de sangre ciertos componentes del reactivo de DRABKIN. En primer lugar, el Fe2+ se oxida a Fe3+, dando lugar a metahemoglobina. 

Hb Fe (II)+ Fe (III) (CN)6 3          =       Hb Fe (III)+ Fe (III) (CN)6 4   


Luego, en presencia de cianuro potásico, pasa a cianmetahemoglobina, de color rojo y con un pico de absorción máximo a 540 nm y cuya concentración puede ser determinada por métodos colorimétricos, empleando un patrón de concentración conocida. 

Hb Fe (III)+  CN-           =                  Hb Fe (III) CN

  • MATERIAL Y REACTIVOS   

7 tubos de ensayo 
Pipeta de 5ml 
Prepipeta 
Micropipeta 
Puntas de micropipeta 
Vaso de precipitado 
Parafilm 
Espectrofotómetro  
Matraz aforado 
Reactivo de Drabkin: 
Patrón de Hb (preparado comercial) 
Sangre venosa anticoagulada 



 

  • DESARROLLO

El patrón fue hecho por unos compañeros, así que nosotros solo tenemos que hacer el blanco y la muestra, con 2,5 ml de reactivo y 10 ul de sangre. 

Longitud de onda a 540 nm  

Cada grupo se ocupara de un patrón, 15 g/dL, 7,5 y 3,5 habiendo así 3 patrones diferentes.

Una vez preparados todos los patrones y el blanco de reactivo y ajustar el espectrofotómetro a 540 nm como longitud de onda, se miden las absorbancias.  

  • CALCULOS Y RESULTADOS 

Absorbancias: 

RT: 0,00 A

Patrón 1: 0,293 A

Patrón 2: 0,123 A

Patrón 3: 0,058 A

Muestra: 0,740 A

Se elige uno de los tres patrones, nosotros el 1º ,15 g/dL 

 Concentración patrón (15 g/dL)---------Absorbancia patrón
            X----------------------------------Absorbancia muestra 

 X= concent. Patrón x Absorb. Muestra/ Absorb. Patrón 

 O bien: A muestra/Apatron = C muestra/C patron; 

 C muestra (g/dL) = A muestra x Cpatron/ A patrón


RESULTADOS: 

 Patrón 1: 37,88 g/dl 

Patrón 2: 45,12 g/dl 

Patrón 3: 47,84 g/dl  

Muestra: 37,88 g/dl 
 

 


 








 

 


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