PRACTICA 19 : 2º TRIMESTRE 17 de febrero 2021

 2º TRIMESTRE

PRACTICA 19 

DETERMINACION DEL HIERRO SERICO 

• OBJETIVO

Determinar la sideremia: la cantidad de hierro en sangre, en el plasma, utilizando el espectrofotómetro.

• FUNDAMENTO 

Se trata de un método colorimétrico de la casa Spinreact (se adjunta el protocolo) que utiliza como muestra plasma. Primero separa el hierro de la transferrina y a través del ácido ascórbico pasarlo a ion ferroso, que en presencia de Ferrozine forma un complejo coloreado cuya intensidad es proporcional a la concentración de hierro en la muestra. 

El procedimiento que seguimos es primero el llenado de las cubetas (utilizar tubos después a cubetas) como se muestra en la tabla. A continuación se mezclan bien y se dejan incubar durante unos 10 minutos para por último medir su absorbancia en el espectrofotómetro. Para realizar los cálculos posteriores es importante saber que la concentración del patrón es de 100 µg/dl.

• MATERIAL Y REACTIVOS  

R1: Tampón Acetato pH 4,9             100mmol/L 

R2: Reductor Ácido ascórbico          99,7%  

R3: Color FerroZine                          40mmol/L  

Patrón                                                100 microg/L

Cubetas 

Espectrofotómetro  

• DESARROLLO 

Para preparar el reactivo de trabajo (RT), disolvemos el contenido de un tubo de R2  en el de R1. Lo tapamos y movemos suavemente, hasta disolver el contenido. 

Para hacer los demás reactivos correctamente seguiremos esta tabla:  

Cubetas	Blanco RT	Patrón	Blanco Muestra	Muestra
RT (ml)	1,0	1,0	1,0	1,0
R3 (gotas)	1	1	---	1
Agua destilada (µl)	200	---	---	---
Patrón (µl)	---	200	---	------
Muestra (µl)	---		200	200

 

 Ajustamos el espectrofotómetro a 562 nm y el agua destilada. 

• CALCULOS Y RESULTADOS 

Patrón: 0,091 A 

Blanco muestra: 0,032 A 

Muestra: 0,112 A 
 

CALCULOS:

(Muestra - Blanco muestra) * 100/Patrón= 87,91 ug/dl de hierro 

Factor de conversión:  87,91 * 0,179 = 15,73 umol/L 

Esta persona puede ser hombre o mujer. 

Ya que los valores normales para hombre son  65-175 ug/dl o 11,6-31,3 umol/L  

Y el de las mujeres son 40-150 ug/dl o 7,16-26,85 umol/L