PRACTICAS 12 ; 1º TRIMESTRE 1 de diciembre 2020

 1º TRIMESTRE

PRACTICA 12

TINCION VITAL Y CONTAJE DE RETICULOCITOS

  • OBJETIVOS 

Identificar los reticulocitos presentes en una muestra de sangre, reconocer y observar su aspecto, y ver la relación entre la cantidad presente de estas células, con respecto a 2000 hematíes.

  • FUNDAMENTO 

Podemos observar los reticulocitos al microscopio óptico mediante la tinción de azul de metileno nuevo o azul de cresil brillante.  

En este caso la tinción es de células vivas, TINCIÓN VITAL. 
Por ello 1º se va a teñir la sangre y después se va a hacer la extensión. Al extenderlas se produce la desecación de las células como único medio de fijación, para que no mueran; es decir no se va a utilizar fijador (metanol). 
Lo que se va a estudiar es el grado de maduración del reticulocito: desde grado I a IV. Cuantos más retículos o restos de RNA menos maduros. También se va a contar el nº de reticulocitos con respecto a hematíes.

  • MATERIAL Y REACTIVOS 

 Microscopio óptico.   

 

Tubos de hemólisis. 

Pipetas Pasteur.  

Portaobjetos  

Baño de agua. 

Sistemas de filtración. 

Azul de cresil   

Agua destilada.  

Aceite de inmersión. 

Sangre anticoagulada  

  • DESARROLLO 

 1. 4 gotas del colorante en un tubo de hemólisis y otras 4 gotas de la sangre homogeneizada para una extensión. Vamos a hacer una tinción con cresil brillante y otra con azul de metileno nuevo.  

2. Mezclar suavemente y tapar con parafilm, introducir en el baño maría a 37ºC durante 5 minutos o calentar en cámara de incubación.  

3. Pasado el tiempo volver a homogeneizar y tomar una gota de la suspensión para depositarla en el porta.  

4. Hacer una extensión y dejar secar.

5. Con aceite de inmersión observar la extensión al objetivo de 100x. Los hematíes se habrán teñido de color verde amarillento y los reticulocitos se diferencian por presentar en su interior hilos finos de color azul.
 

  • CALCULOS Y RESULTADOS 

                                                                    Nº reticulocitos contados

% reticulocitos = ----------------------------- x 100

              Nº hematíes contados

Nosotros contamos 32 reticulocitos en 2000 hematíes, por lo que aplicando la formula, el porcentaje de reticulocitos es del 1,6%  

En adultos y niños los valores normales están entre 0,5 y 1,5%. 

Nuestro resultado esta ligeramente alto.  

 


 

Los reticulocitos son aquellos en los que se puede observar como unos hilitos azules en su interior, los cuales corresponden a los restos de núcleo. 

 













 

 

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